细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

实验报告：

一、分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

TMPRSS4(Transmembrane protease serine 4) ELISA KitRat Maoa(Monoamine Oxidase Type A) ELISA KitO-苄基-L-丝氨酸细胞组织蛋白酶K（CATHEPSIN K）活性比色法定量检测试剂盒

ZC3HAV1L ELISA KitRat Gck(Glucokinase) ELISA KitO-苄基-L-丝氨酸组织样品组织蛋白酶K（CATHEPSIN K）活性比色法定量检测试剂盒

ZC3HC1 ELISA KitRat Cd44(CD44 antigen) ELISA KitO-苄基-L-丝氨酸细胞组织蛋白酶B（CATHEPSIN B）活性比色法定量检测试剂盒

ZC3HAV1 ELISA KitRat Drd2(D(2)dopamine receptor) ELISA Kit3-辛基噻吩组织样品组织蛋白酶B（CATHEPSIN B）活性比色法定量检测试剂盒

ZFP36L2 ELISA KitRat Adh1(Alcohol dehydrogenase 1) ELISA Kit3-辛基噻吩血液样品组织蛋白酶B（CATHEPSIN B）活性比色法定量检测试剂盒

NMT1(Glycylpeptide N-tetradecanoyltransferase 1) ELISA KitRat Casp12(Caspase 12) ELISA Kit高氯酸恶嗪4体液样品组织蛋白酶B（CATHEPSIN B）活性比色法定量检测试剂盒

ZCCHC11 ELISA KitRat Klk8(Kallikrein-8) ELISA Kit齐墩果酸细胞组织蛋白酶D（CATHEPSIN D）活性比色法定量检测试剂盒

ZFP64 ELISA KitRat Mif(Macrophage migRation inhibitory factor) ELISA Kit齐墩果酸组织样品组织蛋白酶D（CATHEPSIN D）活性比色法定量检测试剂盒

F9(畸胎瘤细胞)HP(Haptoglobin) ELISA KitALDOB  醛缩酶2抗体叔丁基乙烯基醚加兰他敏进口/国产PIGR  多聚免疫球蛋白受体抗体含量：检查

NKRF ELISA KitAldolase A  醛缩酶A抗体二氯二茂钛炔雌醇进口/国产PRDM2/RIZ1  锌指蛋白RIZ1抗体含量：HPLC法含量测定用

NKIRAS2 ELISA KitAldolase C  醛缩酶C抗体二氯二茂钛炔诺进口/国产PRMT6  组蛋白氨酸转移酶6抗体含量：含量测定

NKTR ELISA KitALF/GTF2A1LF  通用转录因子IIA样因子抗体丙基三甲氧基硅烷4-N-去安乃近进口/国产PRSS8  丝氨酸蛋白酶8抗体含量：检查

NEDD4 ELISA KitALK/CD246  间变型淋巴瘤激酶抗体丙基三甲氧基硅烷曲安德进口/国产TCF3/E2A/E47  转录因子3抗体（螺旋环螺旋蛋白HE47）含量：含量测定

PTHLH(PaRathyroid hormone-related protein) ELISA KitCDC27/ANAPC3  后期促进复合蛋白3抗体三叔丁基膦去酰毛花甙()进口/国产phospho-TCF3/E47/E2A(Thr355)  酸化转录因子3抗体含量：含量测定

NLRP2 ELISA KitCO4A2  胶原蛋白4a2亚基抗体三叔丁基膦糖进口/国产LEPREL2  皮屑样蛋白2抗体含量：含量测定

NEDD4L ELISA KitREM/GTP binding protein REM1  GTP结合蛋白REM1抗体十四烷酞安进口/国产LLGL1/2  相似肿瘤抑制因HUGL抗体含量：UV法含量测定用