细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

半岛bd体育手机客户端 名称	半岛bd体育手机客户端 简称	货号
HEp-2(喉表皮样癌细胞)	HEp-2	GOY-X6386

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

ACTL8 (Actin-like protein 8) ELISA KITRat TGF-α(Transforming Growth Factor Alpha) ELISA KitN-二苯亚甲基甘氨酸苄酯细菌纤维二糖酶（cellobiase）活性比色法定量检测试剂盒

HTR2A (5-hydroxytryptamine receptor 2A) ELISA KITRat Tnfrsf1a(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A) ELISA KitN-(苯甲酰氧基)琥珀酰亚胺真菌/酵母纤维二糖酶（cellobiase）活性比色法定量检测试剂盒

MTRR (Methionine synthase reductase) ELISA KITRat Tnfrsf1b(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B) ELISA KitN-(苯甲酰氧基)琥珀酰亚胺植物纤维二糖酶（cellobiase）活性比色法定量检测试剂盒

PFKFB1 (6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-bisphosphatase 1) ELISA KITRat Pcsk9(Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9) ELISA KitN-(苯甲酰氧基)琥珀酰亚胺真菌/酵母β1，3 D葡聚糖合成酶活性比色法定量检测试剂盒

PGLS (6-phosphogluconolactonase) ELISA KITRat Il23a(Interleukin-23 subunit alpha) ELISA KitN-(苯甲酰氧基)琥珀酰亚胺植物β1，3 D葡聚糖合成酶活性比色法定量检测试剂盒

ZNHIT2 ELISA KitRat MMP-9(Matrix Metalloproteinase-9) ELISA Kit4-硝基吲哚前列腺素D合成酶（prostaglandin D synthase）活性比色法定量检测试剂盒

DHCR7 (7-dehydrocholesterol reductase) ELISA KITRat MPO(Myeloperoxidase) ELISA Kit4-硝基吲哚硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase）活性比色法定量检测试剂盒

ZNHIT1 ELISA KitRat Casp3(Caspase 3) ELISA KitN-羟基琥珀酰亚胺乌头酸酶（aconitase）活性荧光定量检测试剂盒

HEp-2(喉表皮样癌细胞)ONECUT2 ELISA KitG6PDH/H6PD 己糖6磷酸脱氢酶抗体四丁基氢氧化铵牡荆鼠李糖苷进口/国产phospho-ITGB4(Tyr1530) 酸化整合β4抗体含量：HPLC≥98%

ONECUT1 ELISA Kitγ-Catenin γ-连环素/连接蛋白γ抗体四丁基氢氧化铵牡荆进口/国产phospho-RUNX3(Ser338) 酸化Runx3抗体含量：HPLC≥98%

OPA3 ELISA KitThrap3/TRAP150 甲状腺激素受体相关蛋白3抗体四丁基氢氧化铵（R型）人参皂苷Rg3进口/国产GLUT2 葡萄糖转运蛋白2含量：HPLC≥98%

OPTN ELISA KitPRMT5 组蛋白精氨酸甲基转移酶5抗体四丁基氢氧化铵（R型）原人参三醇进口/国产Collagen II/Chondrocalcin Ⅱ型胶原α1蛋白/软骨钙抗体含量：HPLC≥98%

OFD1 ELISA KitELL2 聚合酶延伸因子2抗体四甲基硫酸氢铵雪胆进口/国产Collagen II/Chondrocalcin Ⅱ型胶原α1蛋白/软骨钙抗体含量：HPLC≥98%

OGT ELISA KitEscherichka coli K88-K99/ETECK88 猪源产肠素性大肠杆菌K88-K99抗体四甲基硫酸氢铵雪胆进口/国产PIM3 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PIM3抗体含量：HPLC≥98%

OIP5 ELISA KitCSTF2T/CstF-64 细胞分裂相关蛋白CSTF64抗体十三烷蔓荆子黄进口/国产Hepatitis C Virus NS5a 型肝炎病NS5A抗体含量：HPLC≥98%

OLFM1(Olfactomedin-1) ELISA KitO-GlcNAc transferase O位N-乙酰葡萄糖胺OGT抗体单宁酸龙血B进口/国产Hepatitis C Virus NS4B 型肝炎病NS4B抗体含量：HPLC≥98%