细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

半岛bd体育手机客户端 名称	半岛bd体育手机客户端 简称	货号
BT549(乳腺管癌细胞)	BT549	GOY-X6373

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

DIO3(Type III iodothyronine deiodinase) ELISA KitPorcine HGF(Hepatocyte Growth Factor) ELISA KitN-乙酰-L-色氨酸血液乳酸脱氢酶（LDH）总活性酶动力比色法定量检测试剂盒

APITD1 (Centromere protein S) ELISA KITPorcine CTXI(Cross Linked C-telopeptide of Type I Collagen) ELISA Kit3-氰基吡啶细菌乳酸脱氢酶（LDH）总活性酶动力比色法定量检测试剂盒

AATK (Serine/threonine-protein kinase LMTK1) ELISA KITPorcine MAP(major acute phase protein) ELISA Kit3-氰基吡啶动物线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性定量检测试剂盒

AVPI1 (Arginine vasopressin-induced protein 1) ELISA KITPorcine MPO(MYELOPEROXIDASE) ELISA Kit3-硝基-L-酪氨酸动物线粒体呼吸链复合物II（琥珀酸－辅酶Q还原酶）活性定量检测试剂盒

ALOX5AP (Arachidonate 5-lipoxygenase-activating protein) ELISA KITPorcine IL-12A(Interleukin-12 subunit alpha) ELISA Kit3-硝基-L-酪氨酸动物线粒体呼吸链复合物III（辅酶Q－细胞色素C还原酶）活性定量检测试剂盒

RERE (Arginine-glutamic acid dipeptide repeats protein) ELISA KITPorcine DMT1(Divalent metal transporter 1) ELISA KitN,N'-亚甲基双丙烯酰胺动物线粒体呼吸链复合物IV（正铁细胞色素C－氧化还原酶）活性定量检测试剂盒

ARVCF (Armadillo repeat protein deleted in velo-cardio-facial syndrome) ELISA KITPorcine SDC-1(CD138) ELISA KitN-乙基间甲苯胺动物线粒体呼吸链复合物V（F0F1-ATP酶/ATP合成酶）活性定量检测试剂盒

AIP (AH receptor-interacting protein) ELISA KITPorcine PDGF(Platelet-Derived Growth Factor) ELISA KitN-乙基间甲苯胺激肽释放酶（KALLIKREIN）活性比色法定量检测试剂盒

BT549(乳腺管癌细胞)PINP(N-terminal propeptide of Collagen alpha-1(I) chain) ELISA KitNLRP9 富含亮氨酸重复结构域蛋白9抗体氧化铥(III)紫香酚甙（刺五加甙Ｂ）进口/国产MMP9 质金属蛋白酶9抗体含量：HPLC≥98%

PARVB ELISA KitARMER ARMER抗体2-噻吩甲胺刺五加甙E进口/国产TIMP-1(CT) 金属蛋白酶组织抑制因子-1抗体（C端）含量：HPLC≥98%

PARVG ELISA KitHBXIP 乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白2-噻吩甲胺竹节香附A进口/国产Adducin protein 内收蛋白抗体含量：HPLC≥98%

PAWR(PRKC apoptosis WT1 regulator protein) ELISA KitILP2 抑制细胞凋亡样蛋白2抗体四丁基硫酸氢铵注：（刺五加叶中）进口/国产phospho-c-Jun(Thr91+Thr93) 酸化原癌因c-Jun抗体含量：HPLC≥98%

PARVB ELISA KitInterferon alpha 6 干扰素α6抗体四丁基硫酸氢铵柴胡皂苷A进口/国产Gibberellins 抗赤抗体含量：HPLC≥98%

PASK ELISA KitRffl/RING finger protein 189 环指蛋白189抗体2-噻吩磺酰胺柴胡皂苷C进口/国产phospho-AQP2(Ser264/261) 酸化水通道蛋白2抗体含量：HPLC≥98%

PASK ELISA KitCERKL 视网膜色素变性蛋白26抗体2-噻吩磺酰胺柴胡皂苷D进口/国产Mycobacterium bovis 牛结核杆菌菌体蛋白抗体含量：HPLC≥98%

PARVG ELISA KitCatalase 过氧化氢酶抗体三乙基硼柴胡皂苷B1进口/国产CK12/Cytokeratin 12 细胞角蛋白12抗体含量：HPLC≥98%