实验报告：

一、QGY-7703(肝癌细胞)分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

CEP85 (Centrosomal protein of 85 kDa) ELISA KITPorcine Flt3L(FMS Like Tyrosine Kinase 3 Ligand) ELISA Kit对硝基苯甲酸组织二胺氧化酶（DAO）活性荧光定量检测试剂盒

CINP (Cyclin-dependent kinase 2-interacting protein) ELISA KITPorcine FSH(Follicle-Stimulating Hormone) ELISA Kit对硝基苯胺血液二胺氧化酶（DAO）活性荧光定量检测试剂盒

CXCR6 (C-X-C chemokine receptor type 6) ELISA KITPorcine GC(Glucagon) ELISA Kit对硝基苯胺体液二胺氧化酶（DAO）活性荧光定量检测试剂盒

DAB1(Disabled homolog 1) ELISA KitPorcine GDNF(Glial Cell Line Derived Neurotrophic Factor) ELISA Kit2-(六甲撑亚胺)乙醇细胞多胺氧化酶（PAO）活性比色法定量检测试剂盒

CLCC1 (Chloride channel CLIC-like protein 1) ELISA KITPorcine GFRα1(Glial Cell Line Derived Neurotrophic Factor Receptor Alpha 1) ELISA Kit氢氧化镍组织多胺氧化酶（PAO）活性比色法定量检测试剂盒

CMKLR1 (Chemokine-like receptor 1) ELISA KITPorcine GH(Growth Hormone) ELISA Kit氢氧化镍血液多胺氧化酶（PAO）活性比色法定量检测试剂盒

CHKA (Choline kinase alpha) ELISA KITPorcine GHRH(Growth Hormone Releasing Hormone) ELISA Kit2-硝基苯并呋喃体液多胺氧化酶（PAO）活性比色法定量检测试剂盒

CDCA7L (Cell division cycle-associated 7-like protein) ELISA KITPorcine GS(Gelsolin) ELISA Kit2-硝基苯并呋喃植物多胺氧化酶（PAO）活性比色法定量检测试剂盒

MUSK(Muscle, skeletal receptor tyrosine-protein kinase) ELISA KitWDR16  WD重复蛋白16抗体噻唑蓝水飞蓟宾进口/国产TASK 3/KCNK9  酸敏感性离子通道蛋白抗体含量：HPLC≥98%

PHC2 ELISA KitWDR19  WD重复膜蛋白19抗体噻唑蓝香柚皮苷进口/国产TSLP  胸质淋巴细胞生成-1抗体含量：HPLC≥98%

PHD1 ELISA KitWSB2/WD SOCS box protein 2  信号传导抑制蛋白WD重复蛋白2抗体3,4,5-三甲氧基苯甲酸芍药苷进口/国产Myosin-XVIIIb  肌球蛋白XVIIIb抗体含量：HPLC≥98%

PHD2(Prolyl hydroxylase domain-containing protein 2) ELISA KitWWP1  WW结构域E3泛素连接酶1抗体3,4,5-三甲氧基苯甲酸鼠李糖进口/国产RBPJK/RBP-J  Notch转录调控蛋白RBPJK抗体含量：HPLC≥98%

PGK2 ELISA KitYY1AP1/HCCA2  肝癌相关蛋白2抗体（转录因子YY1结合蛋白1抗体）四甲基氟化铵甜菜进口/国产Maltose Binding Protein/MBP  麦芽糖结合蛋白抗体含量：HPLC≥98%

PGRMC2 ELISA KitZNF146  锌指蛋白146抗体四乙基氯化铵盐酸甜菜进口/国产HPV33 E6  人类状瘤病33抗体含量：HPLC≥98%

PHACTR1 ELISA KitZNF23  锌指蛋白23抗体钨粉甜菊苷进口/国产HPV33 E7  人类状瘤病33抗体含量：HPLC≥95%

PGRMC1 ELISA KitZNF364/BCA2/RNF115  乳腺癌相关基因2抗体（锌指蛋白364）钨粉天进口/国产PHGDH  酸甘油酸脱氢酶抗体含量：HPLC≥98%

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。