特性：

GBC-SD(胆囊癌细胞)安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

CCNYL1 (Cyclin-Y-like protein 1) ELISA KITMonkey FSH(follicle-stimulating hormone) ELISA Kit草酸铌体液黄嘌呤氧化酶活性荧光定量检测试剂盒

CMAS (N-acylneuraminate cytidylyltransferase) ELISA KITMonkey GNRH(Gonadotropin-releasing hormone) ELISA Kit草酸铌细胞单胺氧化酶（MAO）总活性比色法定量检测试剂盒

CCNYL3 (Putative cyclin-Y-like protein 3) ELISA KITMonkey CTXI(Cross-linked C-telopeptide of Type I Collagen) ELISA Kit草酸铌组织单胺氧化酶（MAO）总活性比色法定量检测试剂盒

CDK16 (Cyclin-dependent kinase 16) ELISA KITMonkey BGP(Osteocalcin) ELISA Kit去甲托品酮盐酸盐体液单胺氧化酶（MAO）总活性比色法定量检测试剂盒

CAND1 (Cullin-associated NEDD8-dissociated protein 1) ELISA KITPorcine ACTH(Adrenocorticotropic Hormone) ELISA Kit去甲托品酮盐酸盐细胞单胺氧化酶A型（MAO－A）活性比色法定量检测试剂盒

CCNYL2 (Cyclin-Y-like protein 2) ELISA KITPorcine ADP/Acrp30(Adiponectin) ELISA Kit(N),(N)-二甲基对苯二胺硫酸盐组织单胺氧化酶A型（MAO－A）活性比色法定量检测试剂盒

CWF19L1 (CWF19-like protein 1) ELISA KITPorcine ALP(Alkaline Phosphatase) ELISA Kit(N),(N)-二甲基对苯二胺硫酸盐体液单胺氧化酶A型（MAO－A）活性比色法定量检测试剂盒

CRELD1 (Cysteine-rich with EGF-like domain protein 1) ELISA KITPorcine ANG(Angiogenin) ELISA KitN,N'-二苯基对苯二胺细胞单胺氧化酶B型（MAO－B）活性比色法定量检测试剂盒

IL20RA(Interleukin-20 receptor subunit alpha) ELISA KitANAPC1  细胞周期末期促进复合蛋白APC1抗体氯化钨(VI)rosin进口/国产ABCA1/ABC1  苷三酸结合盒转运体A1抗体含量：HPLC≥98%

PIK3C2B ELISA KitAGEs  晚期糖基化终末产物抗体茶多酚rosiridin进口/国产ABCD1/CCL22  嗜酸粒细胞趋化蛋白22抗体含量：HPLC≥98%

PIK3IP1 ELISA KitCalpastatin  钙蛋白酶抑制蛋白抗体茶多酚槐果进口/国产ABCB5  ATP结合蛋白家族5抗体含量：HPLC≥98%

IL20RA(Interleukin-20 receptor subunit alpha) ELISA KitTRPC3  色氨酸相关蛋白3抗体三(4-氟苯基)膦花旗松（二氢槲皮）进口/国产ABCB6  ATP结合蛋白家族6抗体含量：HPLC≥98%

PIK3C2B ELISA KitRAB7  RAS癌基因相关蛋白RAB7抗体三(4-氟苯基)膦槲皮进口/国产ABCF1  ATP结合盒蛋白家族GCN20F家族1抗体含量：HPLC≥98%

PIK3IP1 ELISA KitSeptin 2/Sept2/NEDD5  神经前体细胞表达发育下调蛋白5抗体塔拉萨敏槲皮苷进口/国产ABCG1  三酸苷结合盒亚家族G1抗体含量：HPLC≥98%

PIK3C2G ELISA KitPrkg1/cGKI  cGMP依赖性蛋白激酶1抗体2,4,6-三甲基吡啶对甲苯磺酸盐蒿进口/国产ABCG2/CD338  三酸苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体含量：HPLC≥98%

PILRA ELISA KitPP2A beta/PPP2CB  蛋白质磷酸酶2B抗体 PP2A β PP2A-β2,4,6-三甲基吡啶对甲苯磺酸盐姜黄进口/国产KAT4  细胞周期因1蛋白抗体含量：HPLC≥98%

实验报告：

一、分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。