细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

半岛bd体育手机客户端 名称	半岛bd体育手机客户端 简称	货号
U251(胶质瘤细胞)	U251	GOY-X6345

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

ENDOU (Poly(U)-specific endoribonuclease) ELISA KITMonkey IL-9(Interleukin 9) ELISA KitN-苄氧羰基-L-2-苯甘氨酸体液脊髓过氧化酶（MPO）活性高质敏感比色法定量检测试剂盒

ENDOD1 (Endonuclease domain-containing 1 protein) ELISA KITMonkey INS(Insulin) ELISA KitN-苄氧羰基-L-2-苯甘氨酸体液脊髓过氧化酶（MPO）活性（DTNB）高质敏感比色法定量检测试剂盒

DSTYK (Dual serine/threonine and tyrosine protein kinase) ELISA KITMonkey KIM-1(Kidney Injury Molecule 1) ELISA KitN-Boc-甘氨酸-N-甲氧基-N-甲基酰胺血清脊髓过氧化酶（MPO）活性比色法定量检测试剂盒

DUPD1 (Dual specificity phosphatase DUPD1) ELISA KITMonkey LEP(Leptin) ELISA KitN-Boc-甘氨酸-N-甲氧基-N-甲基酰胺血清脊髓过氧化酶（MPO）活性高质敏感比色法定量检测试剂盒

DOHH (Deoxyhypusine hydroxylase) ELISA KITMonkey LEPR(Leptin Receptor) ELISA KitN-Boc-甘氨酸-N-甲氧基-N-甲基酰胺血清脊髓过氧化酶（MPO）活性高质敏感（DTNB）比色法定量检测试剂盒

ENAM (Enamelin) ELISA KITMonkey MCP-1(Monocyte Chemotactic Protein 1) ELISA KitN-BOC-(METHYLAMINO)ACETALDEHYDE组织脊髓过氧化酶（MPO）活性比色法定量检测试剂盒

DISP2 (Protein dispatched homolog 2) ELISA KITMonkey MIP-3α(Macrophage Inflammatory Protein 3 Alpha) ELISA KitN-BOC-(METHYLAMINO)ACETALDEHYDE组织脊髓过氧化酶（MPO）活性高质敏感比色法定量检测试剂盒

DNASE1L2 (Deoxyribonuclease-1-like 2) ELISA KITMonkey MMP-2(Matrix Metalloproteinase 2) ELISA KitN-叔丁氧羰基-3-哌啶酮组织脊髓过氧化酶（MPO）活性高质敏感（DTNB）比色法定量检测试剂盒

U251(胶质瘤细胞)LDLR(Low-density lipoprotein receptor) ELISA KitGephyrin 桥尾蛋白抗体溴代叔丁烷新绿原酸（5-酰奎宁酸）进口/国产GLI1/Zfp5 脑胶质瘤相关蛋白抗体（锌指蛋白5）含量：HPLC≥98%

PLK4 ELISA KitWNT7A 原癌基因wnt7a蛋白抗体溴代叔丁烷隐绿原酸（4-酰奎宁酸）进口/国产Involucrin 包蛋白/内披蛋白抗体含量：HPLC≥99%

PLK5 ELISA KitBLK/MODY11 B淋巴细胞酪氨酸激酶抗体6-硫鸟嘌呤异绿原酸A（3,5-二酰奎宁酸）进口/国产Fibrinogen 羊抗人纤维蛋白原抗体含量：HPLC≥98%

PLOD2 ELISA KitCOG1 COG1蛋白抗体6-硫鸟嘌呤异绿原酸B（3,4-二酰奎宁酸）进口/国产S100B/S100 beta S100B蛋白抗体含量：HPLC≥98%

PLUNC ELISA KitBAP31 BAP31蛋白抗体2-四氢呋喃甲酸异绿原酸C（4,5-二酰奎宁酸）进口/国产GDF8 生长分化因子8/肌肉抑制抗体含量：HPLC≥98%

PLSCR4 ELISA KitADORA1/Adenosine A1 Receptor 腺苷A1受体抗体2-四氢呋喃甲酸1-酰奎宁酸进口/国产2,4-D 2，4-二酸(除草剂)抗体含量：HPLC≥98%

PLP2(Proteolipid protein 2) ELISA KitSDHB 铬细胞瘤患者抑癌基因SDHB抗体(1-羟甲基环丙基)-叔丁氧羰基氨基洋蓟（1,3-二酰奎宁酸）进口/国产2,4-D(24D1) 2，4-二酸(除草剂)单克隆抗体含量：HPLC≥98%

PLXDC2 ELISA KitApoER2 载脂蛋白E2受体抗体(1-羟甲基环丙基)-叔丁氧羰基氨基1,5-二酰奎宁酸进口/国产eIF4EBP1/4EBP1 eIF4E结合蛋白抗体含量：HPLC≥98%