组成及试剂配制:

1、酶标板：一块（96孔）

2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、 样品稀释液：1×20ml。

4、 检测稀释液A：1×10ml。

5、 检测稀释液B：1×10ml。

半岛bd体育手机客户端 名称	英文名称	编号
鸡马立克病毒(MDV)核酸试剂盒	详见说明书	GOY-M1607

规格：50T
分类：PCR检测试剂盒

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光。

有效期：一年

货期：现货PCR试剂盒的有效期一般为1年，这是指在适当的储存温度下。核酸扩增部分的试剂一般要贮存于-20℃下，产物检测部分试剂则贮存于2-8℃。尽量避免反复冻融。

【结果分析条件设定】

u 基线（Baseline）设定：应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域（所有样本荧光信号无较大波动），起始点（Start）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（End）应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环，建议基线设为6~15。

u 阈值(Threshold)设定：将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。

【质控标准】

1. 阴性质控品的检测结果应为阴性，无指数扩增期，Ct=40或无Ct；

2. 阳性质控品的检测结果应为阳性，有明显的指数扩增期，Ct值应小于等于35；

3. 以上要求需在一次实验中同时满足，否则该次实验视为无效。

【结果判断】

1. 阳性：有明显的指数扩增期，且Ct＜38；

2.可疑：有明显的指数扩增期，且38≤Ct<40，此时样本为可疑样本；对于可疑样本建议复核一次，若复核结果Ct<40且有指数扩增期，则判定为阳性，否则判定为阴性；

3. 阴性：无指数扩增期，Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。

【对检验结果的解释】

1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果；

2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，可能会导致出现假阴性结果。

鸡马立克病毒(MDV)核酸试剂盒PCR反应的特异性决定因素为：

　　　①引物与模板DNA特异正确的结合；

　　　②碱基配对原则；

　　　③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；

　　　④靶基因的特异性与保守性。

其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。

(2) 灵敏度高

PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。

(3) 简便、快速

PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。

(4) 对标本的纯度要求低

不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

地衣芽孢杆菌 ATCC 14580Sterile filtered Sheep serum, 0.2 micron小鼠胰岛β细胞

无害李斯特菌 ATCC 33090Sterile filtered Sheep serum, 0.2 micron, heat inactived神经元细胞

生孢梭菌 NCTC 12935Sterile filtered chicken serum, 0.2 micron, charcoal stripped人骨髓基质细胞

粪肠球菌 NCTC 12697Sterile filtered chicken serum, 0.2 micron,charcoal stripped人皮肤T淋巴细胞瘤细胞

产气荚膜梭菌 NCTC 8798Sterile filtered chicken serum, 0.2 micron, charcoal stripped, heat inactived小鼠肾脏内髓集合管3上皮细胞

单核增生李斯特氏菌 NCTC 11994Non-sterile newborn calf serum人晶状体上皮细胞

霍氏肠杆菌Non-sterile calf serum人淋巴内皮细胞

梨形肠杆菌Non-sterile bovine serum大鼠视网膜Muller细胞

吉伦氏柠檬酸杆菌Non-sterile canine serum人肺鳞癌细胞

鸡马立克病毒(MDV)核酸试剂盒D虫荧光素游离酸5mg

Annexin A11FastDigest? MlyI (SchI)100 react小鼠神经型一氧化氮合成酶(nNOS/NOS1)免疫试剂盒

Annexin A13FastDigest? XapI50 react小鼠神经细胞粘附分子1(NCAM1)免疫试剂盒

phosphoACTH (Ser168)FastDigest? XapI100 react小鼠神经特异性烯醇化酶(NSE)免疫试剂盒

phosphoAKT1 (Ser246)FastDigest? AlwNI (CaiI)50 react小鼠神经肽Y(NPY)免疫试剂盒

phosphoAKT1/3 (Tyr473)FastDigest? BspCNI (BseMII)20 react小鼠神经丝蛋白L(NFL)免疫试剂盒

phosphoalpha 1 Sodium Potassium ATPase (Tyr260) FastDigest? ApaI300 react小鼠神经生长因子前体(proNGF)免疫试剂盒

phosphoalpha Adducin(Ser436)FastDigest? ScrFI (Bme1390I)100 react小鼠神经生长因子(NGF)免疫试剂盒

phosphoAMPK alpha 1 (Ser487)FastDigest? PshAI (BoxI)100 react小鼠神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫试剂盒