组成及试剂配制:

1、酶标板：一块（96孔）

2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、 样品稀释液：1×20ml。

4、 检测稀释液A：1×10ml。

5、 检测稀释液B：1×10ml。

半岛bd体育手机客户端 名称	英文名称	编号
猪乙型脑炎病毒PCR检测试剂盒	详见说明书	GOY-M1592

规格：50T
分类：PCR检测试剂盒

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光。

有效期：一年

货期：现货PCR试剂盒的有效期一般为1年，这是指在适当的储存温度下。核酸扩增部分的试剂一般要贮存于-20℃下，产物检测部分试剂则贮存于2-8℃。尽量避免反复冻融。

【结果分析条件设定】

u 基线（Baseline）设定：应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域（所有样本荧光信号无较大波动），起始点（Start）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（End）应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环，建议基线设为6~15。

u 阈值(Threshold)设定：将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。

【质控标准】

1. 阴性质控品的检测结果应为阴性，无指数扩增期，Ct=40或无Ct；

2. 阳性质控品的检测结果应为阳性，有明显的指数扩增期，Ct值应小于等于35；

3. 以上要求需在一次实验中同时满足，否则该次实验视为无效。

【结果判断】

1. 阳性：有明显的指数扩增期，且Ct＜38；

2.可疑：有明显的指数扩增期，且38≤Ct<40，此时样本为可疑样本；对于可疑样本建议复核一次，若复核结果Ct<40且有指数扩增期，则判定为阳性，否则判定为阴性；

3. 阴性：无指数扩增期，Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。

【对检验结果的解释】

1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果；

2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，可能会导致出现假阴性结果。

猪乙型脑炎病毒PCR检测试剂盒PCR反应的特异性决定因素为：

　　　①引物与模板DNA特异正确的结合；

　　　②碱基配对原则；

　　　③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；

　　　④靶基因的特异性与保守性。

其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。

(2) 灵敏度高

PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。

(3) 简便、快速

PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。

(4) 对标本的纯度要求低

不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

难鉴定的/ 血培养Human von Willebrand Factor人软骨肉瘤细胞

产黄青霉生物检定参照物Human vWF - Factor VIII Free大鼠气管上皮细胞

断发毛癣菌生物检定参照物Human Antithrombin III人肺腺癌细胞

木葡糖酸醋杆菌生物检定参照物Mouse Antithrombin III急性单核细胞白血病细胞

唐菖蒲伯克霍尔德菌生物检定参照物Human β2-Glycoprotein I人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞

绿浅气球菌生物检定参照物Human glu-Plasminogen人乳腺上皮细胞

多粘类芽孢杆菌生物检定参照物Human glu-Plasminogen CHOI人正常结肠上皮细胞

奈瑟菌生物检定参照物Human glu-Plasminogen CHOII人肾小球系膜细胞

发酵毕赤酵母菌生物检定参照物Human lys-Plasminogen人鼻咽癌细胞

浅白隐球酵母菌生物检定参照物Bovine glu-Plasminogen人正常结肠上皮细胞

蜡样芽胞杆菌生物检定参照物Mouse glu-Plasminogen人冠状动脉内皮细胞

沙门氏菌生物检定参照物Human α-Thrombin人小细胞肺癌细胞

苏云金杆菌生物检定参照物Human α-Thrombin-DFP小鼠肾癌细胞

肠系膜明串珠菌生物检定参照物Human α-Thrombin-FPRck (FPR-CMK*)小鼠B细胞淋巴瘤细胞

具核梭杆菌生物检定参照物Human α-Thrombin-BFPRck (Biotin)小鼠结肠癌细胞

发光杆菌生物检定参照物Bovine α-Thrombin视网膜Muller干细胞

嗜血杆菌生物检定参照物Bovine α-Thrombin-DFP大鼠成纤维细胞

小孢子菌生物检定参照物Bovine α-Thrombin-FPRck (FPR-CMK*)小鼠骨样细胞

乳酸乳球菌生物检定参照物Bovine α-Thrombin-BFPRck (Biotin)小鼠肺上皮细胞

丁香假单胞菌生物检定参照物Mouse Thrombin人巨细胞白血病细胞株

猪乙型脑炎病毒PCR检测试剂盒姜烯酚Cy5 亚磷酰胺5mg

ALS2CR2缓冲蛋白胨水90ml/瓶小鼠肝细胞生长因子激活物(HGFAC)免疫试剂盒

ATP citrate lyase改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤万古酶素10ml 30 支/盒小鼠肝细胞生长因子(HGF)免疫试剂盒

APBB1 interacting protein 1胰酪胨大豆琼脂培养基（β内酰胺酶）90mm 10 个/包小鼠甘油三酯(TG)免疫试剂盒

alpha Adducin 胰酪胨大豆琼脂培养基200ml/瓶小鼠甘油醛3磷酸脱氢酶(GAPDH/G3PDH)免疫试剂盒

Alpha 2 antiplasmin 赖氨酸脱羧酶试验培养基2ml 30 支/盒小鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)免疫试剂盒

Annexin A7鸟氨酸脱羧酶试验培养基2ml 30 支/盒小鼠干扰素诱导蛋白10(IP10/CXCL10)免疫试剂盒

APH1a蔗糖发酵管5ml 30 支/盒小鼠干扰素调节因子5(IRF5)免疫试剂盒

ATP1A1山梨醇发酵管5ml 30 支/盒小鼠钙卫蛋白(CALP)免疫试剂盒