【质控标准】

1. 阴性质控品的检测结果应为阴性，无指数扩增期，Ct=40或无Ct；

2. 阳性质控品的检测结果应为阳性，有明显的指数扩增期，Ct值应小于等于35；

3. 以上要求需在一次实验中同时满足，否则该次实验视为无效。

【结果判断】

1. 阳性：有明显的指数扩增期，且Ct＜38；

2.可疑：有明显的指数扩增期，且38≤Ct<40，此时样本为可疑样本；对于可疑样本建议复核一次，若复核结果Ct<40且有指数扩增期，则判定为阳性，否则判定为阴性；

3. 阴性：无指数扩增期，Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。

【对检验结果的解释】

1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果；

2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，可能会导致出现假阴性结果。

组成及试剂配制:

1、酶标板：一块（96孔）

2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3、 样品稀释液：1×20ml。

4、 检测稀释液A：1×10ml。

5、 检测稀释液B：1×10ml。

半岛bd体育手机客户端 名称	英文名称	编号
猪链球菌基因分型PCR检测试剂盒	详见说明书	GOY-M1578

规格：50T
分类：PCR检测试剂盒

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输：低温、避光。

有效期：一年

货期：现货PCR试剂盒的有效期一般为1年，这是指在适当的储存温度下。核酸扩增部分的试剂一般要贮存于-20℃下，产物检测部分试剂则贮存于2-8℃。尽量避免反复冻融。

猪链球菌基因分型PCR检测试剂盒PCR反应的特异性决定因素为：

　　　①引物与模板DNA特异正确的结合；

　　　②碱基配对原则；

　　　③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性；

　　　④靶基因的特异性与保守性。

其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。

(2) 灵敏度高

PCR产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞；在病毒的检测中，PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位)；在细菌学中zui小检出率为3个细菌。

(3) 简便、快速

PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶，一次性地将反应液加好后，即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放射性污染、易推广。

(4) 对标本的纯度要求低

不需要分离病毒或细菌及培养细胞，DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

马链球菌兽疫亚种33398Rubella?E2?Envelope?Protein?Antigen,Recombinant人咽头癌胸水转移细胞

难辨梭状芽孢杆菌700057Rubella人咽鳞癌细胞

鸟肠球菌14025Protein人前列腺癌细胞

尿道寡源杆菌17960Rubella Virus人前列腺癌细胞

普通变形杆菌49132Virus人前列腺癌细胞

奇异变形杆菌35659E1人胃腺癌细胞

奇异变形杆菌43071Rubella?Virus?E1/E2/C人胃癌细胞（未分化）

奇异变形杆菌BAA-856Rubella?Virus?E2人胃癌细胞

前庭链球菌49124Rubella?Antigen人胃癌细胞

人葡萄球菌人亚种27844Rubella?Virus?Antigen >90%人胃癌细胞

嗜麦芽窄食单胞菌51331Rubella?Virus,Grade?III?Antigen>60%人滑膜肉瘤细胞

嗜沫凝聚杆菌13252Rubella?Virus,Grade?IV?Antigen >90%人甲状腺鳞癌细胞

嗜水气单胞菌35654Rubella?IgG?Labeled?with?HRP人甲状腺癌细胞

斯氏普罗威登斯菌49809Rubella?IgG?Labeled with?HRP人子宫鳞癌细胞

松鼠葡萄球菌49575Specifications人子宫内膜腺癌细胞

猪链球菌基因分型PCR检测试剂盒3'DABCYL CPG *1000 ?*5mg

AgrinElution Buffer (from GeneJET? Plasmid Miniprep Kit)30 ml小鼠抗人生长激素(IgG)免疫试剂盒

AIFBinding Buffer (from GeneJET? Gel Extraction Kit)150 ml小鼠抗平滑肌(ASMA)免疫试剂盒

AIFWash Buffer (from GeneJET? Gel Extraction Kit)45 ml小鼠抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)免疫试剂盒

ALK5X Reaction Mix (from Maxima? First Strand cDNA Synthesis Kit)0.2 ml小鼠抗内皮细胞(AECA)免疫试剂盒

AMACR5X Reaction Mix (from Maxima? First Strand cDNA Synthesis Kit)0.8 ml小鼠抗利尿激素/血管加压素/精氨酸加压素(ADH/VP/AVP)免疫试剂盒

Annexin A1Lysis Solution (from GeneJET? Genomic DNA Purification Kit)2x60 ml小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)免疫试剂盒

ATG1/ULK1Wash Buffer I (concentrated; from GeneJET? Genomic DNA Purification Kit)40 ml小鼠抗精子(AsAb)免疫试剂盒

beta Amyloid 116Wash Buffer II (concentrated; from GeneJET? Genomic DNA Purification Kit)40 ml小鼠抗甲状腺球蛋白(ATGA/TGAB)免疫试剂盒
【结果分析条件设定】

u 基线（Baseline）设定：应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域（所有样本荧光信号无较大波动），起始点（Start）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（End）应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环，建议基线设为6~15。

u 阈值(Threshold)设定：将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。