物种

Pan-species (General，通用)

实验方法

竞争抑制

反应时长

2h

检测范围

6.17-500ng/mL

灵敏度

最小可检测剂量小于等于2.67ng/mL.

样本类型

血清, 血浆, 组织匀浆, 细胞裂解液, 细胞培养上清和其他生物标本

特异性

本试剂盒用于检测鞘氨醇(Sph)，经检测与其它相似物质无明显交叉反应。
由于受到技术及样本来源的限制，不可能完成对所有相关或相似物质交叉反应检测，因此本试剂盒有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。

回收率

分别于定值血清及血浆样本中加入一定量的鞘氨醇(Sph)（加标样品），重复测定并计算其均值，回收率为测定值与理论值的比率。

样本	回收率范围(%)	平均回收率(%)
serum(n=5)	82-96	90
EDTA plasma(n=5)	81-102	89
heparin plasma(n=5)	78-89	82

精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%) = SD/mean×100
批内差：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20 次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批间差：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批内差： CV<10%
批间差： CV<12%

线性

在定值血清及血浆样本内加入适量的鞘氨醇(Sph)，并倍比稀释成1:2，1:4，1:8，1:16的待测样本，线性范围即为稀释后样本中鞘氨醇(Sph)含量的测定值与理论值的比率。

样本	1:2	1:4	1:8	1:16
serum(n=5)	88-95%	79-92%	83-101%	79-91%
EDTA plasma(n=5)	91-99%	84-98%	94-102%	88-104%
heparin plasma(n=5)	96-104%	92-99%	78-95%	78-103%

稳定性

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

实验流程

1、实验前标准品、试剂及样本的准备；
2、加样（标准品及样本）50?L，
加入50?L检测液A(临用前配制);
37℃温育1小时。
3、洗板3次；
4、加检测溶液B100?L，37℃孵育30分钟；
5、洗板5次；
6、加TMB底物90?L，37℃孵育10-20分钟；
7、加终止液50?L，立即450nm读数。

实验原理

本试剂盒应用竞争抑制酶联免疫分析法测定标本中待测物质水平。将鞘氨醇(Sph)单克隆抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗体的微孔中同时加入生物素标记的抗原和待测抗原(标准品或样本)，待测抗原与生物素标记抗原对特异性抗体进行竞争结合。温育后经洗涤去掉未结合物，然后加入HRP标记的亲和素，经过温育和彻底洗涤后加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。待测标本浓度越高，标记抗原和抗体的结合就越受到抑制，显色愈浅。显色的深浅与酶量呈正相关，而与样品中待测物质含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。