物种

Homo sapiens (Human，人), Mus musculus (Mouse，小鼠), Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

实验方法

双抗夹心

反应时长

3h

检测范围

1.56-100ng/mL

灵敏度

最小可检测剂量小于等于0.65ng/mL.

样本类型

血清, 血浆, 组织匀浆, 细胞裂解液, 细胞培养上清和其他生物标本

特异性

本试剂盒对检测90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)具有较高的灵敏度。
经检测人、小鼠、大鼠之间有100%的交叉反映。

回收率

分别于定值血清及血浆样本中加入一定量的90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)（加标样品），重复测定并计算其均值，回收率为测定值与理论值的比率。

样本	回收率范围(%)	平均回收率(%)
serum(n=5)	87-94	91
EDTA plasma(n=5)	78-96	85
heparin plasma(n=5)	79-96	78

精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%) = SD/mean×100
批内差：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20 次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批间差：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批内差： CV<10%
批间差： CV<12%

线性

在定值血清及血浆样本内加入适量的90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)，并倍比稀释成1:2，1:4，1:8，1:16的待测样本，线性范围即为稀释后样本中90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)含量的测定值与理论值的比率。

样本	1:2	1:4	1:8	1:16
serum(n=5)	84-92%	95-103%	90-98%	81-89%
EDTA plasma(n=5)	90-101%	86-102%	93-101%	99-105%
heparin plasma(n=5)	89-101%	94-102%	87-103%	85-97%

稳定性

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

实验流程

1、实验前标准品、试剂及样本的准备；
2、加样（标准品及样本）100μL，37℃孵育1小时；
3、吸弃，加检测溶液A100μL，37℃孵育1小时；
4、洗板3次；
5、加检测溶液B100μL，37℃孵育30分钟；
6、洗板5次；
7、加TMB底物90μL，37℃孵育10-20分钟；
8、加终止液50μL，立即450nm读数。

实验原理

将90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的90kDa热休克蛋白αA1(HSP90aA1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值)，计算样品浓度。