物种

Homo sapiens (Human，人)

实验方法

双抗夹心

反应时长

3h

检测范围

15.6-1,000pg/mL

灵敏度

最小可检测剂量小于等于5.8pg/mL.

样本类型

血清, 血浆, 组织匀浆, 细胞裂解液, 细胞培养上清和其他生物标本

特异性

本试剂盒用于检测血管内皮生长因子165(VEGF165)，经检测与其它相似物质无明显交叉反应。
由于受到技术及样本来源的限制，不可能完成对所有相关或相似物质交叉反应检测，因此本试剂盒有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。

回收率

分别于定值血清及血浆样本中加入一定量的血管内皮生长因子165(VEGF165)（加标样品），重复测定并计算其均值，回收率为测定值与理论值的比率。

样本	回收率范围(%)	平均回收率(%)
serum(n=5)	98-105	101
EDTA plasma(n=5)	95-102	99
heparin plasma(n=5)	91-101	94

精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%) = SD/mean×100
批内差：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20 次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批间差：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批内差： CV<10%
批间差： CV<12%

线性

在定值血清及血浆样本内加入适量的血管内皮生长因子165(VEGF165)，并倍比稀释成1:2，1:4，1:8，1:16的待测样本，线性范围即为稀释后样本中血管内皮生长因子165(VEGF165)含量的测定值与理论值的比率。

样本	1:2	1:4	1:8	1:16
serum(n=5)	86-94%	84-101%	78-97%	92-101%
EDTA plasma(n=5)	85-93%	87-103%	88-95%	93-101%
heparin plasma(n=5)	86-97%	79-103%	80-103%	95-105%

稳定性

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

实验流程

1、实验前标准品、试剂及样本的准备；
2、加样（标准品及样本）100?L，37℃孵育1小时；
3、吸弃，加检测溶液A100?L，37℃孵育1小时；
4、洗板3次；
5、加检测溶液B100?L，37℃孵育30分钟；
6、洗板5次；
7、加TMB底物90?L，37℃孵育10-20分钟；
8、加终止液50?L，立即450nm读数。

实验原理

将血管内皮生长因子165(VEGF165)抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的血管内皮生长因子165(VEGF165)与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的血管内皮生长因子165(VEGF165)抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加入HRP标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管内皮生长因子165(VEGF165)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值)，计算样品浓度。