半岛bd体育手机客户端 组分
P2071 |
|
|
2×FSTMMix |
1ml |
1支 |
超纯水 |
1ml |
1支 |
P2072 |
|
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2×FSTMMix |
1ml |
1支×5 |
超纯水 |
1ml |
1支×5 |
注: 本半岛bd体育手机客户端 分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的半岛bd体育手机客户端 ,PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类半岛bd体育手机客户端 的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包含溴酚蓝的包装。
保存条件
-20℃保存2年。
请勿保存于-70℃,防止反复冻融导致酶活降低。
半岛bd体育手机客户端 说明
FSTMMix是2×浓缩的快速高效PCR预混和溶液,含有FSTMTaq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分(模板与引物除外)。使用时,仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行PCR,大大简化操作过程,缩短操作时间,降低污染(加样次数减少)。FSTMMix的反应体系经特殊优化,减少引物二聚体的形成,显著提高PCR扩增的特异性。同时,由于体系内含有增强剂,能够显著增强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有3'-dA突出端。
FSTMTaq DNA 聚合酶 是东盛根据蛋白工程原理,以Taq DNA 聚合酶为基础研发的新型DNA聚合酶。本半岛bd体育手机客户端 具备类似KOD酶快速扩增能力,延伸速度可达3 kb/min,是普通Taq DNA 聚合酶的3倍,可缩短一半以上的PCR扩增时间。同时具备普通Taq DNA 聚合酶扩增效率高、适应性广等优点。
半岛bd体育手机客户端 特点
高特异性
使用方便:仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。
快速、高效:减少加样步骤,节约时间。
可重复:降低污染和加样错误风险
半岛bd体育手机客户端 用途
高特异性PCR检测
高通量PCR检测
高重复性PCR检测
制备TA克隆用的PCR产物
活性定义
一个活性单位(U)指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在72℃、30 min内,摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。
质量控制
相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因;室温放置一周,扩增活性无明显改变。
应用举例
注:以下反应举例为25 μl标准PCR体系,仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化,确定最佳反应条件。
以λDNA为模板,扩增1kb片段。
λ DNA(2.5 ng/μl) |
0.5μl |
引物1 (10 μM) |
1 μl |
引物2 (10 μM) |
1 μl |
2×FSTMMix |
12.5 μl |
超纯水 |
补足至25 μl |
PCR反应条件
多数模板的快速扩增条件
94℃ |
4 min |
94℃ |
30 sec |
55~68℃ |
30 sec 30 Cycles |
72℃ |
20 sec |
72℃ |
2 min |
1kb简单模板的快速扩增条件
95℃ |
3min |
95℃ |
15 sec |
55~68℃ |
15 sec 30 Cycles |
72℃ |
20 sec |
72℃ |
2 min |
注:由于1 kb简单模板的二级结构简单,且长度较短,可同时缩短变性、退火时间至15 s,以实现快速扩增。
注意事项
1、使用本半岛bd体育手机客户端 时,引物、模板、dNTP用量跟普通PCR Mix的一样,为实现快速扩增,请尽量选用小体反应体系。
2、退火温度一般为TM-5℃或TM-8℃,稍低的退火温度有利于实现快速扩增。
3、延伸时间视片段长度而定。一般情况,≤500 bp目的片段延伸15 s;500 bp-1 kb目的片段延伸20 s;>1 kb目的片段,延伸时间按 20s/kb计算,如1.5 kb目的片段延伸30 s、3 kb目的片段延伸60 s。
4、FSTM Taq DNA聚合酶具有脱氧核苷酸转移酶活性,因此在PCR产物3'末端通常会加上一个多余的脱氧腺嘌呤核苷。
5、建议在冰上配置PCR 反应液后,再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性,减少非特异性扩增,得到良好的PCR结果。
6、50μl PCR反应体系中模板DNA推荐用量
人类基因组DNA |
0.1μg------1μg |
λDNA |
0.5ng--------5ng |
质粒DNA |
0.1ng------10ng |
大肠杆菌DNA |
10ng-----100ng |
Q&A
问:使用FSTMMix 扩增时是否需要使用快速PCR扩增仪?
答:不需要,使用普通的PCR扩增仪即可。
问:FSTMMix 的使用与普通PCR Mix 有何不同?
答:使用方法与普通Taq Mix 基本相同,只需注意扩增条件中时间适当缩短。
问:FSTMMix 扩增产物是否可用于TA克隆?
答:FSTMTaq DNA 聚合酶 没有3-5外切酶活性,所以PCR产物末端带 A,可进行TA克隆。