摘要：本文建立了一种使用岛津高效液相色谱仪LC-20A和三重四极杆质谱仪LCMS-8030联用定性鉴别阿胶药材的方法。本文参照《中国药典(2015版)》中阿胶项下，使用胰蛋白酶酶解阿胶样品，选择阿胶的特征肽作为定性依据；按照药典要求建立了m/z539.8>612.4和m/z539.8>923.8检测离子对，且对照品溶液及市售药材样品中阿胶特征肽的信噪比均远远大于3:1。该方法完全满足药典的要求，实现阿胶药材的快速、准确、炅敏的定性分析。

关键词：高效液相色谱 三重四极杆质谱 阿胶特征肽段

胶类药材是具有典型民族特色的传统中药，为动物的皮熬制而成的明胶类物质。阿胶系驴皮经煎煮浓缩成的固体胶，能补血滋阴、润燥止血，用于贫血心悸、燥咳咯血、先兆流产、产后血虚、肌痿无力，是中医临床常用补益药。阿胶经水解后其胶原蛋白变为分子量更小 的肽类，从而失去原有胶原蛋白的性质，无法进行来源鉴别。2015版药典对阿胶的定性方法进行了修订，由2010版的茚三酮显色法修改为采用液质联用的方法检测特征肽段，方法更科学可靠。

本文利用岛津三重四极杆液质联用系统LCMS-8030对阿胶中的特征肽段进行了分析，建立了阿胶定性鉴别分析方法，可为该类样品的分析提供参考。

■实验部分

1.1 半岛游戏平台官网入口网址

岛津高效液相色谱仪LC-20A与三重四极杆质谱仪LCMS-8030联用系统。具体配置为LC-20AD×2输液泵，DGU-20A3在线脱气机，SIL-20AC自动进样器，CTO-20A柱温箱，CBM-20A系统控制器，LCMS-8030三重四极杆质谱仪，LabSolutions Ver.5.60SP2色谱工作站。

1.2 分析条件

液相条件

色谱柱：Inertsil ODS-4 (2.1 mm I.D.×250 mm L., 5μm)
流动相：A相-0.1%甲酸水溶液
B相-乙腈
流速：0.3 mL/min
柱温：40℃
进样量：5μL
洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为5%，洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序

Time(min)	Module	Action	Value
0.00	Pumps	Pump B Cone.	5
20.00	Pumps	Pump B Cone.	20
40.00	Pumps	Pump B Cone.	50
40.10	Pumps	Pump B Cone.	100
45.00	Pumps	Pump B Cone.	100
45.10	Pumps	Pump B Cone.	5
55.00	Controller	Stop

质谱条件
离子化模式：ESI，正离子模式
离子喷雾电压：+4.5kV
雾化气流速：氮气3.OL/min
干燥气流速：氮气15L/min
碰撞气：氩气
DL 温度：250℃
加热模块温度：400℃
扫描模式：多反应监测(MRM)
驻留时间：100 ms
延迟时间：3 ms

表2 MRM优化参数

化合物名称	前体离子	产物离子	Q1 Pre Bais(V)	CE(V)	Q3 Pre Bais(V)
驴皮特征肽段	539.8	612.4	-38	-22	-22
		923.8	-38	-24	-40

1.3 对照品和样品配制及前处理方法

取对照药材或待测样品粉末0.1g，加1% NH₄HC0₃溶液50mL，超声处理30min，使用微孔滤膜滤过。参照《中国药典(2015版）》阿胶项下，取滤液100μL，置于进样瓶中，加胰蛋白酶溶液（取序列分析纯胰蛋白酶适量，加1% NH₄HC0₃溶液溶解，制成每lμL中含lmg胰蛋白酶的溶液)l0μL，摇匀，37℃恒温酶解12h，作为对照药材溶液或供试液，进LCMS-8030分析。

■结果与讨论

2.1 阿胶对照药材的MRM色谱图

图1 阿胶对照药材特征多肽的MRM色谱图

LCMSMS分析获得阿胶对照药材特征多肽的MRM色谱图，保留时间为：13.76 min，图1中两对特征离子对539.8>612.4以及539.8>923.8的信噪比分别为1161和705，充分满足药典中要求的色谱峰信噪比大于3:1的要求。

2.2 实际样品分析

对市售的一种阿胶药材样品进行分析，结果如图2和表3所示。

图2 市售阿胶样品的MRM色谱图

表3 实际样品中驴皮源特征肽段分析结果

样品编号	离子对信息	保留时间(min)	峰高	峰面积	信噪比
样品	539.8>612.4	13.76	1266	18994	464
	539.8>923.8		856	12360	499

■结论

本文建立了一种使用岛津三重四极杆液质联用仪LCMS-8030鉴定阿胶中特征肽段，实现了阿胶定性鉴别的方法。该方法所检测阿胶特征肽段MRM色谱图中离子对539.8>612.4, 539.8>923.8的响应明显，完全满足2015版药典要求色谱峰信噪比大于3:1的要求，市售阿胶药材样品分析结果表明所测样品中含有阿胶成分。因此，本方法可为应对药典要求实现阿胶药材的快速、准确、灵敏的定性鉴别提供参考。