基本信息

半岛bd体育手机客户端 描述

BX-795是一种有效的，特异性的PDK1抑制剂，在无细胞试验中IC50为6 nM，作用于PDK1比作用于PKA和PKC选择性分别高140和1600倍。同时，相比于 GSK3β，作用于PDK1的选择性高出100多倍。

靶点（IC50 & Targe）

CDK2/CyclinE,430nM

Chk1,510nM

c-Kit,320nM

PDK1,6nM

体外研究

BX795也抑制MARK1,MARK2,MARK4,NUAK1,VEGFR,MLK1,MLK2,和MLK3，IC50分别为55,53,19,5,157,50,46和42 nM。1 μM BX795不抑制如下酪氨酸蛋白激酶: 肝配蛋白受体A2和B3,Syk,Bruton's酪氨酸激酶,和FGFR1。然而，BX795抑制VEGFR，抑制效果比TBK1低。BX795抑制TBK1-催化的IRF3在Ser396位点磷酸化随着ATP浓度上升而下降,说明BX795是ATP竞争性抑制剂。BX795阻断TBK1和IKKε调节的IRF3激活，且抑制IFN-β的产量。聚(I:C)处理后，IRF3在核中积累，但是可被BX795抑制。 BX795抑制IRF3依赖的基因转录。BX795抑制IFN-β从巨噬细胞中分泌。BX795对LPS刺激的p70核糖体S6激酶1在Thr229位点磷酸化没有效果, Thr229位点是PDK1作用靶点。BX795不影响IKKα/β复合体或LPS,聚(I:C),IL-1α,或TNFα促进的NFκB依赖的基因转录的激活。BX795作用于IL-1α或TNFα刺激的MEFs，也阻断JNK1/2和p38α MAPK磷酸化。BX795抑制TBK1/IKKε不会导致JNK1/2和p38α MAPK的激活。[1]

激酶实验

蛋白激酶实验:

加入γ-32PATP(1000 cpm/pmol)开始实验，终浓度为0.1 mM。使用GST-IRF3作为底物, BX795抑制反应在30oC下进行30分钟，加入含40 mM EDTA,pH 为7.0的SDS终止反应，在100oC下加热5分钟，通过SDS-PAGE分离, 然后通过放射自显影技术测定磷酸化的蛋白。通过感光成像分析进行量化处理。IκBα底物肽实验在30oC下进行10分钟， 使一部分反应物放到一张2×2-cm2浸泡在75 mM磷酸中的磷酸纤维素P81纸上，终止反应。在磷酸中冲洗6次，在丙酮中冲洗1次，烘干纸，计数。

细胞实验

Cell lines: MDA-468, MDA-453, HCT-116, U87-MG

Concentrations: 0.001-1 μM

Incubation Time: 72小时

Method: 细胞系包括MDA-468,MDA-453,HCT-116,U87-MG等按每孔1.5-3×103个细胞接种在96孔板上，过夜。每孔加入溶于1% DMSO和生长培养基(DMSO最终浓度为0.1%)的10 μL BX795, 震荡处理。细胞温育72小时，加入10 μL代谢染料测定活力。在450 nm处测定WST-1信号。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Feldman RI, et al. J Biol Chem. 2005, 280(20), 19867-19874.

[2] Clark K, et al. J Biol Chem. 2009, 284(21), 14136-14146.

[3] Dangelmaier C, et al. Thromb Haemost. 2013,111(4).