探针法Candidatus Mycoplasma haemobos实时定量PCR试剂盒

Probe-quantitative Real-time PCR Kit for Candidatus Mycoplasma haemobos

货号：Mqt-hbo-20      规格：20个反应

货号：Mqt-hbo-50      规格：50个反应

货号：Mqt-hbo-100     规格：100个反应

储存：-20度，避光保存，有效期一年。避免反复冻融。

试剂盒特点：

1，  特异性检测Candidatus Mycoplasma haemobos，不受其他基因组干扰。

2，  灵敏度高，反应液中仅1个基因组时检出率为69%。线性范围跨越8个数量级。

3，  使用的DNA聚合酶具有抗抑制能力强和热稳定性好的特点；采用热启动方式，可抑制非特异性扩增，降低背景荧光。

4，  带有阳性对照样品，可用于检验试剂盒有效性。

5，  带有UDG酶和dUTP，可降低残留DNA的污染。

嗜血支原体（Hemotropic Mycoplasma，或hemoplasma)是一类寄生于红细胞表面的细菌，无细胞壁，可以感染很多哺乳动物，包括猫、犬、猪、牛、羊等，也包括人类。嗜血支原体曾被命名为血巴尔通体（Hemobartonella）和附红细胞体（Eperythrozoon），根据16S rRNA基因序列分析，被重新归类为支原体。在牛体内已发现的嗜血支原体有两种：维容氏支原体（Mycoplasma wenyonii）和Candidatus Mycoplasma haemobos。

Candidatus Mycoplasma haemobos发现较晚，直至本世纪才有报导，分布较为广泛，在中国、日本、瑞士、德国和巴西等都有发现，临床症状尚不清楚。其16S rRNA基因较维容氏支原体短，相似度仅81.2%，与猫血支原体有95%的相似度，因而在分类上与猫血支原体更为接近。

Candidatus Mycoplasma haemobos尚无合适的体外培养方法，因此难以开发蛋白类检测方法。检测方法一般采用吉姆萨染色的血涂片法。血涂片法的检测灵敏度和特异性均比较差，容易受到人工制片方法和血液里其他成分的干扰，且支原体易从红细胞表面脱落，造成漏检。而PCR法在灵敏度上则有明显的优势，且可以区分支原体种类。定量PCR法与普通PCR法相比，不仅可以进行定量分析，而且操作更为方便，更少受环境污染的影响。

本试剂盒基于16S rRNA基因的保守区域，设计特异性引物和探针，经BLAST验证，可以准确识别Candidatus Mycoplasma haemobos，与其他生物基因组无交叉反应。经检测，本试剂盒与维容氏支原体、猫和犬的3种嗜血支原体、及4种非嗜血支原体均无交叉反应,因此，可用于Candidatus Mycoplasma haemobos的检测和鉴定。

本试剂盒包含热启动DNA聚合酶、dNTP（以dUTP代替dTTP）、引物、探针、阳性对照品、ROX染料，和用以防止残余DNA污染的UDG（Uracil- DNA Glycosylase，尿嘧啶-DNA-糖基酶），用户只需准备好DNA样品即可使用。

本试剂盒采用的DNA聚合酶源自极端嗜热菌（Thermus thermophilus），经改造后较普通的Taq酶具有更强的抗抑制能力和热稳定性。通过结合特异性单克隆抗体，在室温下DNA聚合酶活性被抑制。在PCR循环的热变性阶段，抗体受热被去除，此时DNA聚合酶活性恢复，因此获得“热启动”功能。热启动可减少残余DNA的污染，提高PCR扩增效率、灵敏度和目的片段产量。

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